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化工原料常见问题

二甲基亚砜DMSO细胞冻存

频道:化工原料常见问题 日期: 浏览:89

  二甲基亚砜(DimethylSulfoxide,简称DMSO)是一种含硫有机化合物,常温下为无色无臭的透明液体,具有高极性、高沸点、热稳定性好、非质子、与水混溶的特性,能溶于乙醇、丙醇、苯和氯仿等大多数有机物。  

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DMSO的广泛应用  

一直以来不仅工业领域频频出现,更是在科研实验中频繁被使用,因它对许多药物具有溶液性、渗透性,本身也具有消炎、止痛、利尿、镇静和促进伤口愈合等作用,因此在国外被称为“万能药”。  

作为一名优秀的“工具人”,无论是在实验室,还是医学、健康领域,二甲基亚砜都勤勤恳恳地发挥着自己的后勤作用。不过今天,小编带大家了解下其中一个领域应用,DMSO与细胞冻存的小知识吧~  

DMSO与细胞冻存  

细胞冻存是将细胞储存在低温环境中,减少细胞代谢,实现长期储存的一种技术。在大多数细胞系中,细胞会随着衰老和演化不断的积累改变,造成表型和基因型的“培养漂移”,在冻存过程中,适当的操作和合适的冻存条件可以减少细胞特性的改变或丢失,起到细胞保护的作用。因而,正确且成功的冻存对于细胞的长久应用起着非常重要的作用。  

1950年代,英国科学家发现DMSO在深低温(零下200度)保存细胞时可以用作抗冻剂,快速穿透细胞膜进入细胞中,降低冰点、延缓冻存过程,同时提高细胞内离子浓度,,减少细胞内冰晶的形成,从而减少细胞损伤,是目前广泛使用的的细胞冷冻保护剂。  

为什么必须使用细胞冷冻保存剂才会让细胞不会被冻死呢?  

冷冻并非是细胞冻死的主因,相反,低温可以减缓甚至暂停细胞生命运动,并达到冻存保存效果。真正促使细胞死亡的原因是细胞内水分的冷冻,因为在冷冻的过程中细胞内的水分会结冰,结冰又会造成细胞双重伤害。  

伤害一:细胞被冻死的首要原因是细胞内水结冰,在结冰的过程中非常容易造成各种生物膜破坏,进而导致细胞死亡。  

伤害二:水结冰导致的物理现象会造成体积增加,伴随此情况会导致细胞内各种物质空间上的位移,蛋白变形或功能上失去活性,更有可能在体积膨胀过程中导致细胞膜破裂。  

制备DMSO细胞保存剂的方法  

DMSO可广泛应用在人、动物细胞株及细菌噬菌体λ的低温防护中,那么如何制备DMSO溶液用来冷冻细胞呢?  

制备DMSO细胞保存剂的方法.png

1.配制冷冻培养基:含有细胞培养用培养基、10-20%血清和5-10%DMSO;  

2.用胰酶或其他合适的方法消化贴壁细胞;(细胞最好处于对数增长期)  

3.低速离心(4°C,250×g,10min)收集细胞,吸取培养基;  

4.用冷冻培养基悬浮细胞,使细胞密度为106-107cells/mL;  

5.平均分配细胞,装入冻存管内;  

6.依照标准冻存程序冷冻细胞,冻存在-70°C或更低的温度内;  

提问:细胞冻存为何要慢冻快融?  

慢冻:主要防止细胞冷冻过程中形成的冰晶对细胞造成损伤,如果细胞内的水分可以在降温过程中渗透出来,则细胞内的冰晶将会减少。保持缓慢冷却速度—大约每分钟1~3℃,可使细胞内的水分更容易在降温过程中渗透出来,从而达到减少细胞内形成的冰晶数。但是另一方面,细胞体积会因为流失水分而缩小,体积一旦缩小到一定程度下,则细胞很快会失去生存能力,添加DMSO可以有效减缓因为水分渗出导致的细胞生存能力的下降。  

快融:主要防止DMSO在液体状态下对细胞造成毒害作用,快速使细胞进入复苏和生长状态。很多因素会影响解冻后细胞的存活率,不同细胞株可能需要部分调整冷冻保存的步骤和方法以提高细胞解冻后的存活率。提高存活率的关键要素有:冷冻培养基的组成,细胞生长期(Growthphase),细胞周期(CellCycle)状态以及冷冻培养基中的细胞数和细胞浓度。   

DMSO与MPBiomedicals  

细胞冻存实验操作流程复杂,稍有不慎,就可能伤害珍贵的细胞,影响细胞复苏,而DMSO是目前较好的细胞冻存保护剂。MPBiomedicals目前可提供多款DMSO及其相关产品,供客户选购。

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