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化工原料常见问题

dmso在冻存细胞中的作用

频道:化工原料常见问题 日期: 浏览:91
DMSO属于一种可渗透到细胞内的冷冻保护剂。在细胞冷冻悬液完全凝固之前,DMSO渗透到细胞内,在细胞内外产生一定的摩尔浓度,降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度,从而保护细胞免受高浓度电解质的损伤,同时,细胞内水分也不会过分外渗,避免了细胞过分脱水皱缩。


值得注意的是,DMSO在常温下对细胞的毒性作用较大,而在4°C时,其毒性作用大大减弱,且能以较快的速度渗透到细胞内。所以,冻存时需要彻底预冷冻存液,放置在4°C需要至少30分钟的时间。最简便的方法,当然是将冻存液一直放在4°C冰箱中,随用随取,用完放回冰箱。

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滴加冻存液冻存细胞时,滴加速度要缓慢,如果滴加速度过快,则在细胞外产生很高的渗透压,造成细胞膜的损伤,导致细胞死亡,故要缓慢滴加,让冻存液有足够的时间缓慢渗透到细胞内,达到细胞内外的平衡。

DMSO在低温下能保护细胞,但在常温下却对细胞有害,研究结果表明,培养液中DMSO浓度为10 %时,细胞生长抑制率近100 %;1%浓度时抑制率为35%,即使是0.04 %的浓度,DMSO对细胞的生长也有不利的影响。正是因为如此,细胞复苏后需要离心去除DMSO。

问题来了,使用DMSO配制冻存液,怎么保证无菌呢?其实,大可不必担心DMSO的无菌问题。研究表明,2%的DMSO,就能抑制白色念珠菌和酵母菌等多种细菌的生长。基于DMSO如此优秀的抑菌性,高纯度的DMSO视乎无菌,可以直接配制使用,不必大费周章的高压灭菌或过滤除菌。如果非要过滤,需要选择0.22um的尼龙膜或者PTFE膜。最后,需要注意的是配制和使用时含DMSO的冻存液时需要做好个人防护,戴好手套。虽然DMSO对于人体来说,低毒甚至近乎无毒,由于它极强的皮肤渗透性,很多药物选择用DMSO溶解加以治疗疾病,但DMSO易引起皮肤过敏,因此不想皮肤瘙痒、烧灼,散发出大蒜般气味的话还是认真做好防护工作吧。


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