欢迎访问上海艺之函化学科技有限公司官网!

化工原料常见问题

dmso细胞冻存技巧

频道:化工原料常见问题 日期: 浏览:98

二甲基亚砜(DimethylSulfoxide,简称DMSO)是一种含硫有机化合物,常温下为无色无臭的透明液体,具有高极性、高沸点、热稳定性好、非质子、与水混溶的特性,能溶于乙醇、丙醇、苯和氯仿等大多数有机物。  

DMSO的广泛应用.png

DMSO的广泛应用  

细胞冻存是将细胞储存在低温环境中,减少细胞代谢,实现长期储存的一种技术。在大多数细胞系中,细胞会随着衰老和演化不断的积累改变,造成表型和基因型的“培养漂移”,在冻存过程中,适当的操作和合适的冻存条件可以减少细胞特性的改变或丢失,起到细胞保护的作用。因而,正确且成功的冻存对于细胞的长久应用起着非常重要的作用。  

1950年代,英国科学家发现DMSO在深低温(零下200度)保存细胞时可以用作抗冻剂,快速穿透细胞膜进入细胞中,降低冰点、延缓冻存过程,同时提高细胞内离子浓度,,减少细胞内冰晶的形成,从而减少细胞损伤,是目前广泛使用的的细胞冷冻保护剂。  

以下这些靠谱的小技巧,帮您扫除细胞冻存、细胞复苏中可能遇到的障碍。  


成功冻存细胞和复苏细胞是细胞培养研究的两个重要方面,细胞本身的特性和细胞低温储藏时防止冰晶形成是维持细胞活力的关键。  

细胞冻存DMSO推荐使用方法(仅供参考):  

1.配制冷冻培养基:含有细胞培养用培养基、10-20%血清和5-10%DMSO;  

2.用胰酶或其他合适的方法消化贴壁细胞;(细胞最好处于对数增长期)  

3.低速离心(4°C,250×g,10min)收集细胞,吸取培养基;  

4.用冷冻培养基悬浮细胞,使细胞密度为106-107cells/mL;  

5.平均分配细胞,装入冻存管内;  

6.依照标准冻存程序冷冻细胞,冻存在-70°C或更低的温度内;  

1.冻存“年轻力壮”的细胞  

为保证细胞在复苏后,有良好的增殖能力,建议冻存传代三代以内的细胞。俗话说得好,年轻人的恢复能力是杠杠滴!细胞亦是如此~  

在冻存前,一定要先了解清楚该细胞的

增殖能力并冻存适当数量的细胞


每种细胞的增殖能力各不相同,知己知彼才能百战不殆。如果增殖能力不高,可以在冻存细胞时,用10%-90%的血清(多数常见细胞株可用20%)维护细胞活力,并且提高每份冻存的细胞数量。  

通常,冻存液中细胞的最终密度为5×106/mL~1×107/mL。如同美食和闺蜜使我心宽体胖,细胞也需要充足的营养和同伴的互相扶持才能茁壮成长。  

细胞冻存一定要缓慢降温

DMSO可保护细胞免受冰晶导致的机械损伤,一般用培养液配制10%DMSO作为冻存液。  

但是如果降温迅速,即使有DMSO的保护,也可能会产生少量冰晶损伤细胞。  

因此,可将加入冻存液的细胞悬液放入程序降温盒保存至-80℃过夜,缓慢降温(若没有程序降温盒,可以先在4℃冰箱放置30min,然后转移至-20℃放置1-2h,最后转移至-80℃过夜),第二天取出并放入液氮罐中长期保存。  

细胞复苏需快速融化  

必须将冻存的细胞快速融化至37℃(不要超过5min),使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。刚刚复苏的细胞就像刚出生的Baby,整个操作过程需要轻柔缓和。  

2.png

如上所述,细胞冻存前需要做细胞计数以保证冻存适当数量的细胞。


关键词: